①将两种酵母菌置于含酒精的培养基中震荡培养，同时设置的培养基作为对照。每隔一段时间取菌液，利用法接种在固体培养基表面进行计数并计算细胞存活率。

②图1、2结果显示，有利于酵母菌合成海藻糖；结合图3、4结果可知，海藻糖含量高的酵母菌存活率。

③海藻糖含量提高将助于提高酵母菌的酒精耐受力的实验证据有。

①在筛选纯净的酵母菌菌种时，为了更容易得到单菌落，常用方法。扩大培养时，使用的培养基是（填“固体”或“液体”）培养基，并需要提供（填“有氧”或“无氧”）条件。

②酒精发酵装置中弯曲的安全玻璃管可以让瓶中的二氧化碳气体排出，还可以。为了制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量。

③果醋发酵过程中，随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降，这是由于醋杆菌在和酸性环境下将乙醇氧化为醋酸。醋杆菌产生的醋酸可使培养液中的pH值最低达到。

A.2-3 B.3-4 C.4-5 D.5-6

基因敲除是针对某个序列已知但功能未知的基因，改变其基因结构，令该基因功能丧失，从而对生物体造成影响，进而推测出该基因功能的一门技术。以下是制备基因敲除小鼠的过程示意图。

请回答：

①为了获得目的基因，可以用或者PCR扩增法。构建基因敲除载体时需要的工具酶有。

②为了得到胚胎干细胞，可以用消化胚胎组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个胚胎细胞悬浮液，然后进行原代培养和传代培养。也可以直接将胚胎组织从机体中取出后立即进行细胞、组织培养，当细胞从组织块中迁移出来，形成并增大后，再传代培养。

③将囊胚移植到代孕母鼠体内后，其外表的一层扁平细胞，将来会发育为。生产出的一只嵌合体小鼠与野生型小鼠杂交后（假设子代足够多）（一定、不一定）能得到杂合子基因敲除小鼠。基因敲除技术具有广阔的应用前景，请举一例。

Ⅰ.新鲜苹果在压榨之前用浸泡消毒，并冲洗。

Ⅱ.为了提高苹果的出汁率并使果汁变得澄清，制取时常加入果胶酶，为证明其效果，可分别取等量浑浊的苹果汁和澄清的苹果汁，各加入等量的，预计后者出现的沉淀物较少。要扩大培养生产果胶酶的微生物，适宜的培养基是（A，MS 培养基；B，添加蔗糖的豆芽汁；C，蛋白胨和酵母提取物及氯化钠）。

Ⅲ.果酒发酵完毕，静置沉淀后，可用法将上清液取出。若果酒中乙醇的浓度超过%时，酵母菌就会死亡。

Ⅳ.苹果醋是最受欢迎的饮料之一，果醋生产过程利用了微生物的发酵作用。将苹果酒流经发酵瓶制成苹果醋，则发酵瓶中CO₂ 的产生量是（A，与发酵瓶体积相当；B，约为发酵瓶体积的一半；C，几乎为零）。

Ⅰ.过程①中最常用的载体是，所需要的酶是和DNA 连接酶。

Ⅱ.在过程②中，用处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5％CO₂ 的气体环境中，CO₂ 的作用是（A．刺激细胞分裂B．维持培养液的pHC．刺激细胞呼吸D．抑制细胞呼吸）。

Ⅲ.在过程③中，用处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行处理。从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是。

Ⅰ.各大酒庄酿制葡萄酒时，为保持各产区葡萄酒的特有口感，发酵菌种主要来自附在葡萄皮上的。该菌种在学生实验中也被频繁使用。实验室在保存该菌种时，通常将该菌种接种到培养基上，再放入冰箱中冷藏。

Ⅱ.某实验小组酿制的葡萄酒有一股酸味，从发酵条件分析，可能原因是导致醋酸菌大量生长产生醋酸，其反应式为。

Ⅲ.该实验小组为研究过滤、沉淀后葡萄酒中的活菌数，检测流程如图所示。

①检测过程中，应将不同稀释度的样液用法分别接种于若干组平面培养基上，培养24～48小时出现后计数。

②下列关于检测流程的叙述中，正确的是

A．配制培养基时应在调节酸碱度以前灭菌

B．为防止外来微生物污染，应将培养皿倒置在超净台上培养

C．根据培养结果，只需统计适宜稀释度样液组的菌落数

D．理论上，统计分析结果会略高于实际活菌数

Ⅰ.采集卵母细胞：经处理后，用仪器确定卵泡位置，插入穿刺针吸取卵泡液，取出卵母细胞。

Ⅱ.图中“去核”和“取核”的操作方法（可以/不可以）相同。

Ⅲ.过程A使用的技术是。过程B必须借助早期胚胎培养和技术。

Ⅳ.若需要鉴定胚胎的性别，为了降低可能的风险，可取囊胚的细胞进行鉴定。

Ⅴ.从遗传角度分析，“三亲婴儿”技术还可以避免“母亲”的（填细胞结构）中的缺陷基因传递给孩子。

Ⅰ.新鲜苹果在压榨之前用浸泡消毒，并冲洗。

Ⅱ.为了提高苹果的出汁率并使果汁变得澄清，制取时常加入果胶酶，为证明其效果，可分别取等量浑浊的苹果汁和澄清的苹果汁，各加入等量的，预计后者出现的沉淀物较少。要扩大培养生产果胶酶的微生物，适宜的培养基是（A．MS 培养基；B．添加蔗糖的豆芽汁；C．蛋白胨和酵母提取物及氯化钠）。

Ⅲ.果酒发酵完毕，静置沉淀后，可用法将上清液取出。若果酒中乙醇的浓度超过%时，酵母菌就会死亡。

Ⅳ.苹果醋是最受欢迎的饮料之一，果醋生产过程利用了微生物的发酵作用。将苹果酒流经发酵瓶制成苹果醋，则发酵瓶中CO₂ 的产生量是（A．与发酵瓶体积相当；B．约为发酵瓶体积的一半；C．几乎为零）。

Ⅰ.过程①中最常用的载体是，所需要的酶是和DNA 连接酶。

Ⅱ.在过程②中，用处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5％CO₂ 的气体环境中，CO₂ 的作用是（A．刺激细胞分裂B．维持培养液的pHC．刺激细胞呼吸D．抑制细胞呼吸）。

Ⅲ.在过程③中，用处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行处理。从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是。