材料二：T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

（1）过程①和②得到的Y细胞称为 ．得到的单克隆抗体最主要的优点是 ．

（2）抗体1与抗体2的氨基酸排列顺序相同，两者的空间结构是否相同？  ． 为什么？ 

（3）在基因表达载体中，启动子的作用是 识别和结合的部位，驱动V1基因的 

（4）质粒上的标记基因的作用是 ．

（5）过程④要用到的主要酶是

回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

（1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中 ， 并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．

（2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的 键．

（3）组成基因表达载体的单体是 ．基因表达载体中的启动子是 识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过 （填过程）合成mRNA．

（4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？ 

（5）将受体细胞培养成植株需要应用 技术，该技术的理论依据是

苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．下图（一）是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；下图（二）是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的二种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题．

（1）将图（一）①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有 种DNA片段．过程②需要用到 酶．

（2）假设图（一）中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图（一）中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？ ，请说明理由 ．

（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒 

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开       B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开   D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

（4）图（二）中α链是 ．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是 

基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，如图中①﹣③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Amp^r（氨苄青霉素）抗性基因和Tet^r（四环素）抗性基因，其中在Tet^r抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tet^r抗性基因功能性失活），请回答：

（1）如图中①过程所需的酶除DNA连接酶以外，需要的限制酶是 ．

（2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果：A₁是 A₂是 

（3）经过导入过程，B（受体细菌）可能出现结果是 （多选）

A．导入未成功的细菌                   B．含A₁的细菌

C．含A₂的细菌                        D．含A₁和A₂的细菌

（4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括 ．

（5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）

GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

（1）完成图中A过程必需的工具是 ；该基因治疗的受体细胞为  ．

（2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的 限制酶进行酶切．

（3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是﹣C↓AATTG﹣和﹣G↓AATTC﹣．如图2表示四种质粒，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示GDNF基因运载体的是 ．

（4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是 （多选）．

A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同

C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的

（5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为 个，反向连接的重组载体产生片段有 （多选）．

1100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp．

普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏．科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄．如图为操作流程图，据图回答问题．

（1）实验中的目的基因是 

（2）构建基因表达载体时必需的工具酶有 

（3）图中步骤①→②使用的生物技术是 ．这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状，其原因是 

（4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因 

（5）若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F₁中抗软化与不抗软化的植株数量比为3：1，则可推测目的基因整合到了 

A．一对同源染色体的一条上         B．一对同源染色体的两条上

C．两条非同源染色体上             D．一对同源染色体的非姐妹染色体上．

如图所示，质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（X^R）和四环素抗性基因（Y^R）．其中，X^R内部含有限制酶KasI识别序列，Y^R内部含有限制酶FseI、HpaII、

NaeI、NgoMIV识别序列，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．

（1）质粒PBR322的本质是 .FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特点是 

（2）NaeI酶切目的基因和质粒，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作．之后，受体细胞的类型包含 （多选）

A．抗青霉素、抗四环素         B．抗青霉素、不抗四环素

C．不抗青霉素、抗四环素        D．不抗青霉素、不抗四环素

（3）若用KasI和FseI联合酶切上述重组质粒，则可能产生的酶切片段数 ．

A.2 B.3 C.4 D.5

（4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是 ．

A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体

C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作

（5）若目的基因模板链中的TGA序列对应1个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是 ．通过筛选出的受体细胞内，目的基因能成功表达的原因是 ．

2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书．图1表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

（1）④过程应用的主要生物技术是 ；该技术的过程主要包括 和 两个阶段，利用的基本原理是  ．

（2）杀虫基因（crylA）是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于 工程技术范畴．

（3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造．图2是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图2分析：

①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入 ．

②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的 （基因），保证T﹣DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于 ．第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等．

③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒．分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是 ．

（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为 ， 则该酶识别的核苷酸序列是 ．

科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草．图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点．请分析回答下列问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用 技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是、酶、原料、模板，该技术必须用 酶；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有 ．

（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是 ．图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用 酶对外源DNA、质粒进行切割．

（3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是