干旱、除草剂等因素都会影响农作物产量，科学家们对此进行了研究．

（1）研究发现，多数抗旱作物会产生一种代谢产物，调节根部细胞液的渗透压，此代谢产物在叶肉细胞中却很难找到，根本原因是 

（2）图为用探针检验某一抗旱植物基因型的原理，相关基因用R和r表示．若被检植物发生A现象，不发生B、C现象，则被检植物的基因型为 ．图中用PCR技术扩增R或r基因时，需要用寻找抗旱基因的位置．

​

（3）EPSPS是叶绿体中的一种酶，能催化芳香族氨基酸合成；草甘膦是一种除草剂，它能竞争性抑制EPSPS的作用，破坏叶绿体结构，使植物死亡，原因是  ．

（4）研究人员利用如图所示方法成功培育出抗草甘膦大豆，据图分析

要测定EPSPS基因是否整合到大豆的某一染色体上，可用 方法，或直接测定该染色体DNA的 ．上述过程③需将胚尖首先放入含的侵染液中处理，然后再转入到含 的培养基中筛选出抗性芽，再经④过程形成抗草甘膦的大豆植株．

科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因．其技术过程如下（图中的■代表基因前的启动子），据图回答：

（1）loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段，是有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成，自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达，其碱基序列如下：

Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的 酶．从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的 ．

（2）将重组质粒导入到植物细胞中最常用的方法是 ．作为标记基因，抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原因是 

（3）经检测成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会造成的安全问题是 ．经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子．由于 的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失．

（4）loxP序列是有方向性的．如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是 ．

A．两个都是正向       B．两个都是反向

C．一个正向一个反向   D．与方向无关．

以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，请据图回答下列有关问题：

（1）图中对良种奶牛进行处理时用到的激素是 ，①过程必须用到 酶，②过程使用的是酶．③表示 技术，④表示基因工程中 过程；若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法，则方法C是 ．

（2）如果转基因牛D的牛奶中含有  ， 则说明血清蛋白基因在个体水平已表达成功，其他细胞中不含血清蛋白是的结果 ．

（3）图中A和B分别是指 和 ．

（4）图中奶牛的牛粪可以用于生产沼气，沼气工程利用的是生态工程的原理 ．

单克隆抗体可用于疾病的诊断和治疗，制备H7N9病毒单克隆抗体的流程如下：

（1）过程②代表基因工程操作步骤中的 ，进行过程③前须先构建 ．

（2）H7N9抗原基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是 ，可采用 技术进行检测．

（3）细胞Ⅰ是 细胞，细胞Ⅱ应具有的特点是 ．

（4）若要预防H7N9禽流感，可用图中的 作疫苗，对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的 进行特异性结合检测．

（1）科研人员按如一步骤进行操作：

第一步：首先从红花矮牵牛的 细胞中提取mRNA，经逆转录获得CHS基因．

第二步：将CHS基因与质粒构建重组质粒，该过程需要使用 酶和 酶．

第三步：通过 转化法，将其导入植物细胞中．

第四步：将筛选出的成功导入CHS基因的细胞利用 技术培育获得转基因的矮牵牛植株，该技术的原理是 ．

（2）实验结果与预期结果相反，许多转基因植株的花色为白色，为探究其原因，研究人员从白花转基因植株和红花植株的细胞中分别提出总RNA，然后以 作为探针进行 ，结果发现转基因植株中CHS基因的RNA量减少，由此推测，生物体外源CHS基因的转入并未增加CHS基因的表达，甚至连细胞的 基因表达也受到抑制从而使花色为白色．

（3）对上述现象的解释有两种观点，第一种观点认为可能由于 酶未能识别基因首端的 部位，从而不能进行转录，第二种观点认为由于某种原因细胞内转录出了部分的含量．

绒山羊所产山羊绒因其优秀的品质被专家称作“纤维宝石”，是纺织工业最上乘的动物纤维纺织原料．毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关．图甲表示含KIFⅡ基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图乙是获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图（MspI、BamHI、MboI、SinaI四种限制性核酸内切酶识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG）．请分析回答：

（1）用SmaI完全切割图甲中DNA片段，其最短的产物含 个bp．图甲中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐性纯合子中分离出图甲对应的DNA片段，用SmaI完全切割，产物中不同长度的DNA片段有 种．

（2）上述工程中，KIFⅡ称为；为了提高试验成功率，需要通过 技术进行扩增，以获得更多的KIFⅡ．

（3）过程①必须用到的工具酶是 ；在过程③中，为了获得更多的卵（母）细胞，需用 处理成年母绒山羊．

（4）过程④称为 ，进行过程⑤的最佳时期是 ．

（1）要获得编码抗原的基因，首先要提取出病原体的DNA或RNA，并将RNA ，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用 方法．

（2）将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程，通常一个基因表达载体的组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有 

（3）一般将重组质粒利用的方法送人受体细胞，进入细胞核并表达抗原蛋白．

（4）与传统疫苗相比，基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在，还可以诱导产生（填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”）．

（5）一个质粒载体可插人多个抗原基因组成多价疫苗，导人这样的疫苗可达到 的目的．

（6）基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的．基因治疗是把 导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的．

（1）目的基因最终在宿主细胞内维持稳定和表达的过程叫做 ．

（2）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造．如图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制酶作用位点），据图分析：

①人工改造质粒时，要使抗虫基因能成功表达，还应插入 ．

②人工改造质粒时，用限制酶Ⅰ处理，其目的是：

第一，去除和破坏质粒上的 （基因），保证T﹣DNA进入水稻细胞后不会促

进细胞的分裂和生长；

第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于 ．

第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等．

③若用限制酶Ⅱ分别切割经过②过程改造的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒．分别在含四环素或卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长情况是  ．

2011年，科学家将蜘蛛的相关基因导入山羊体内，创造出转基因山羊，使羊奶中含有一种独特的蛛丝蛋白．利用这种蛛丝蛋白制造的蛛丝纤维具有很高的强度和伸缩性．可制成防弹背心、降落伞绳等．如图是生产原理图，请回答问题：

（1）在①过程中用到的酶是 ，在②过程中用到的酶是 ．

（2）将基因表达载体导入受体细胞常用的方法是 ．如果导入的受体细胞为体细胞，则③过程需要的技术操作是 ，重组细胞才具有发育的全能性．

（3）④过程所用的胚胎工程技术是  ， 该过程所用培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和 等．

（4）进行⑤过程需要的技术操作是  ， 最佳时期是 ．

（5）进行⑥过程时，需要对供、受体母羊进行选择，并 处理．

（1）基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其中导入受体细胞前需要进行一个重要的操作步骤，即构建 ，该步骤使用的两种工具酶分别是 ．

（2）从公羊体内采集的精子需经过 处理，才能在体外与卵细胞结合形成受精卵．常用 法将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至 阶段时再移植到母羊子宫中．

（3）利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子是否转录出了 （填“tRNA”、“mRNA”或“rRNA”）；利用针对 的抗体进行抗原﹣抗体杂交，可检测目的基因是否翻译．