内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系．内皮素（ET）主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ETA）结合而发挥生物学效应．科研人员通过构建表达载体，实现ETA基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaI的识别序列为 ， 限制酶XhoI的识别序列为      ． 请据图分析回答：

（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、脱氧核苷酸和 酶等．完成过程①②③的目的是 ．

（2）过程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使 键断开，形成的黏性末端是 ．用两种限制酶切割•获得不同的黏性末端，其主要目的是 

（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是 的部位，进而可驱动基因的转录．除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是 

（4）过程⑥要CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的 细胞．

（5）将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测 

（6）基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中，不仅能有效改良植物的品质．还由于叶绿体转基因不会随（“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而在一定程度上避免转基因作物中的外源基因能扩散到其他同类作物．

如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因．筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行．能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的 ．过程①采用的操作方法通常是 ．

（2）过程②代表的生物技术是 ．对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体．目前最常见的是经分割产生的同卵 胎．

（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 技术．

（4）对代孕牛的要求是

（1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用 技术获取并扩增基因．构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是 ，该基因表达载体中，凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分别是 ．

（2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是 ．受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和 

（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的 进行DNA分析，用于选择雌性胚胎．此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是 

（4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在 等细胞器上进行的．人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是 ．

为实现目的基因与运载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作．请分析回答下列问题：

（1）图表示用BamH I切割含目的基因的 ，质粒经相同限制酶处理后，经 的作用获得a，a称作 ．将a与感受态大肠杆菌混合后，混合物应接种在含有的培养基上．质粒中抗氨苄青霉素基因称为 ，在筛选过程起作用．若要证明培养基是否符合实验要求，培养基上需接种 的感受态大肠杆菌，培养后不出现菌落则培养基合格．

（2）DNA分子中，一条链中的两个核苷酸通过 相连，已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，构建a的过程中用该酶处理质粒，但目的基因不用碱性磷酸酶处理，这样做的目的是 ． 如果要检测目的基因 是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌的 ， 用相应抗体检测．