| 紫杉醇是一种从裸子植物红豆杉的树皮中分离提纯的天然次生代谢产物,具有良好抗癌效果。为了大量获得紫杉醇,现使用基因工程的方法获取能产生紫杉醇的大肠杄菌。下图为获取紫杉醇合成酶基因的步骤示意图。回答相关问题:
Ⅰ.途径1中,通过紫杉醇合成酶的部分氨基酸序列推出可能的,进而推出基因序列,然后通过获得目的基因片段,并利用迅速扩增得到大量目的基因片段,再将其作为DNA探针,从细胞基因文库中钓取目的基因。 Ⅱ.途径2中,诱导合成紫杉醇的细胞总RNA与未经诱导的细胞总RNA存在差异的主要原因是。利用途径2得到的RNA探针从基因文库中钓取时发现,钓取的不全是紫杉醇合成酶基因,同时也会钓取出一些其他的基因,推测可能的原因是。 Ⅲ.构建含紫杉醇合成酶基因的重组载体时,为防止出现自身环化和反向连接,可以用处理目的基因和载体。重组载体应具有、转录终止位点及等功能序列,从而保证构建的重组载体正常表达及便于筛选。 |