乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值．乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源．培养基中琼脂的作用是  ． 从功能上讲，这种培养基属于 

（2）培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌．

（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小．在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 ．

（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 确定其应用价值．除化学结合法外，酶的固定化方法还包括 、 、离子吸附法及交联法等．

实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖．

材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱．

（1）方法步骤：

①倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在 旁操作．

②制备土壤稀释液

③涂布：按照由10⁷～10³稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布 个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个．

④培养：放入恒温箱内，在28℃～30℃下培养3d～4d．

⑤细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数．如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌株数是 ．（稀释度是10⁵）

（2）预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 （选填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目．原因是 ．