万考题-全国中小学题库

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1．

胰岛素 A、B 链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图 1 是该方法所用的基因表达载体,图2 表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B 分别表示-半乳糖苷酶与胰岛素 A、B链融合的蛋白)。请回答下列问题:

图1 基因表达载体中没有标注出来的基本结构是。

图1 中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是。

构建基因表达载体时必需的工具酶有。

茁-半乳糖苷酶与胰岛素A 链或B 链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于。

溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的 A 链或 B 链,且 $\text{[math]}$ -半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为。

根据图2 中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是理由是。

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2．

GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：

在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是。

构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的限制酶进行酶切。

经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。

将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。

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3．在体内，人胰岛素基因表达可合成出一条称为前胰岛素原的肽链，此肽链在内质网中经酶甲切割掉氨基端一段短肽后成为胰岛素原，进入高尔基体的胰岛素原经酶乙切割去除中间片段C后，产生A、B两条肽链，再经酶丙作用生成由51个氨基酸残基组成的胰岛素。目前，利用基因工程技术可大量生产胰岛素。回答下列问题：

（1）人体内合成前胰岛素原的细胞是，合成胰高血糖素的细胞是。

（2）可根据胰岛素原的氨基酸序列，设计并合成编码胰岛素原的序列，用该序列与质粒表达载体构建胰岛素原基因重组表达载体。再经过细菌转化、筛选及鉴定，即可建立能稳定合成的基因工程菌。

（3）用胰岛素原抗体检测该工程菌的培养物时，培养液无抗原抗体反应，菌体有抗原抗体反应，则用该工程菌进行工业发酵时，应从中分离、纯化胰岛素原。胰岛素原经酶处理便可转变为胰岛素。

难度：中等题型:真题来源：

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4．纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。

本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是或。

A.①② B.①③ C.②④ D.③④

设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证不携带纤维素酶基因

纤维素酶基因的表达包括和过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有。

在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株不能存活，原因是。

酵母菌生产酒精的细胞部位是，产生酒精时细胞的呼吸方式是，在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的重组质粒含有。使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。

难度：中等题型:真题来源：

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5．如果人们希望家养宠物的皮肤颜色和蓝精灵一样可爱，那么按照当今生物技术的发展程度，可以采用的技术手段是（）

A: 核移植技术

B: 动物细胞融合

C: 转基因技术

D: 动物细胞培养

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6．关于基因工程的叙述，正确的是：

A: 选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快

B: 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列

C: DNA重组技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体

D: 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达

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7．质粒是基因工程中最常用的运载体，它存在于许多细菌体内。质粒上有标记基因如图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置（插入点有a、b、c），请根据表中提供细菌的生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是