（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的 ，以其作为模板，在 的作用下合成 ．获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞．

（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是 ．该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是  ．

（3）科学家利用人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，制作出了早早孕试纸．要获得人绒毛膜促性腺激素的单克隆抗体，需要先将 注射到小鼠体内，培养一段时间之后，将从小鼠的脾脏中提取出的 和小鼠的骨髓瘤细胞融合，获得

在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长．下图为获得抗虫棉的技术流程．请据图回答

（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、 、将目的基因导入受体细胞、 

（2）A过程需要的酶有 和 

（3）在基因工程中，基因表达载体的构建非常关键，对表达载体的要求是必需具有启动子、、 、 等条件．

（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡．但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长．目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦．

取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知．图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点．据图回答下列问题：

（1）若A﹣C浇清水，D﹣F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是 

（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 

（3）一个完整的基因表达载体除了具备复制原点、启动子和终止子外，还应包括 和 

（4）若需利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是 和 

（5）通常用 法将EPSPS基因导入植物体内．假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因 

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生 末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 （相同，不同）粘性末端的限制酶．

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 ．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为 ．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成 ，常用抗原﹣抗体杂交技术．

如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目睹基因插入农杆菌Ti质粒的 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的 上．

（1）由于科学发展水平的限制，在转基因生物中，有时候会出现一些人们意想不到的后果，引发了人们在食物安全、生物安全和 安全三个方面发生了激烈的争论．

（2）在转基因生物或产品研究过程中，绝大多数科学家都能自觉遵守科学研究道德．如对外源DNA进行认真选择，避免产生对人体有毒性或过敏的 

（3）为解决不孕夫妇的生育问题而出现了试管婴儿技术，而2002年，英国一对夫妇通过设计试管婴儿，利用新生儿脐带血中造血干细胞，挽救患地中海贫血症的男孩．这两项技术的区别是 不需要经过基因检测．

（1）iPS细胞是利用逆转录病毒将Oct3/4、Sox2、Klf4和c﹣Myc 等四个基因转入分化的体细胞中诱导其成为类似胚胎干细胞的一种细胞．将四个目的基因导入体细胞之前，通过 技术进行迅速扩增，然后再与逆转录病毒结合导入体细胞，逆转录病毒所起的作用是 ．

（2）体外受精是对体内受精的模拟操作，首先对实验动物用 处理，使其排出更多的卵子，待精子获能后，可以在 或者专用受精溶液中完成受精．

（3）精卵体外受精后，应将受精卵移入发育培养液培养．它的成分比较复杂，除了一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸、 等物质．

（4）对于“试管动物”的正确理解是 

A．属于无性生殖       B．属于有性生殖           C．体外受精

D．体内受精           E．体外发育                 F．体内发育

G．运用基因工程技术   H．运用细胞工程技术

（5）我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达培育出了抗虫棉．转基因作物的种植使害虫得到有效控制，减少了农药的使用量，保护了生态环境．与此同时，人们对转基因生物的安全性提出了质疑，主要体现在生物安全、 和 等方面．

（6）桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程的 原理．同时，通过饲养家禽、家畜、栽培食用菌，提高农民经济收入，是保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的 原理．我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林称为残败的“灰色长城”．其失败的原因主要是违背了 原理．

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．如图为科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗的技术流程图，据图回答有关问题：

（1）步骤①中，在核移植之前应该采集卵母细胞，采用的主要方法是用 处理，使其排出更多的卵子，然后从 中冲取．

（2）步骤②中，重组细胞培养到囊胚期，可从其 中分离出ES细胞，该细胞在形态上表现为体积小、 、核仁明显；在功能上具有发育的 

（3）步骤③中，将含有Rag₂基因的表达载体导入ES细胞，常采用 法．为检测Rag₂基因是否表达出相应的蛋白质，通常采用 的方法．

（4）转基因和细胞核移植（克隆）等生物技术存在安全性和伦理问题，如科学家赋予转基因生物某些特殊性状，它们有可能成为“入侵的外来物种”，威胁生态系统中其他生物的生存，这属于转基因生物的 （“食品安全”、“生物安全”或“环境安全”）问题；我国政府对待克隆人的态度是 ，不反对治疗性克隆．