（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 连接．

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 ．

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有 种不同DNA片段．

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 ．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 

图是基因工程示意图，请据图回答：

（1）从基因文库中提取的目的基因通过PCR进行扩增时，需使用一种特殊的酶是 ．

（2）进行过程①时，需用 酶切开载体以插入目的基因．载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动目的基因转录，该部位称为 

（3）构建基因表达载体的目的是使 ．

（4）若用重组质粒转入大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 

（5）在抗虫作物的培育过程中，将Bt毒蛋白基因导入作物受体细胞时，常用的方法是 ．

（6）检测细菌的目的基因是否转录出mRNA时，需要用 做探针，再与相应的物质杂交．

（1）用限制酶HindⅢ、BamH I同时切割目的基因，可得到 个DNA片段．

（2）用限制酶HindⅢ和BamH I切割Ti质粒，可得到 个DNA片段．

（3）过程①需要用到 酶．

（4）切割目的基因和质粒的酶与①过程的酶作用的化学键都是 

（5）如果把目的基因直接注入植株细胞，一般会被植株细胞 ．

（6）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有 ，它能把目的基因整合到受体细胞（植株细胞）的 上．

（7）将目的基因导人植物细胞，除采用图中的方法外，还可采用 法和花粉管通道法．

请据图回答：

（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在 酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在 作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的 序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的 序列，再通过化学方法合成所需基因．

（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有 、 、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成．

（3）由A和载体B拼接形成的C通常称为 ．

（4）在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是 ．