井冈霉素是我国目前防治水稻纹枯病的主导农药，由于多年的单一使用，部分地区纹枯病菌对其产生了不同程度的抗药性，迫切需要研发有类似效果的新型替代生物农药．从细菌M18中提取的申嗪霉素能有效抑制水稻纹枯菌，与其它农药相比对人体和动物安全性高．为了开发更稳定、高产的新型菌株，科研人员进行了以下研究．请回答下列问题：

（1）筛选菌株选择 （健康/患纹枯病）的水稻植株的根切成小段放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的  ， 对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据 选出编号为P12的理想菌株．

（2）鉴定菌株P12所属的细菌类型提取P12基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异），扩增过程需要的酶有 ，还需要特定的  ． 对其测序后确定该菌株所属细菌类型．

（3）检测P12的细胞毒性

用人肺癌细胞系A549作为指示株系，在37℃恒温培养箱中培养．通入的空气应含 ，培养液中含少量胎牛血清，目的是 .2h后分别将相同浓度的P12、M18和DH5α（人体肠道内共生的大肠杆菌）菌液5μL加入A549细胞培养液中，4h后测定吸光值，以表示乳酸脱氢酶（LDH）的释放量．LDH是活细胞内含有的酶，当细胞受到细菌攻击时，细胞膜的 改变，LDH释放至细胞外．测定结果显示，P12对A549细胞的毒性

（4）部分地区的纹枯菌对井冈霉素产生抗药性的原因，是由于 对细菌进行长期的选择，使细菌的 发生了改变的结果．

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？ （填“能”或“不能”），原因是 ．

（2）培养基用 方法灭菌，培养皿用 方法灭菌，待培养基冷却到 ℃（填“20”、“30”、“40”或“50”）左右时，在 附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止 ，以免造成污染．

（3）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用 法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大约推测出样品中活菌数．

（4）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是 

（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散．

（1）红茶菌液是一种传统的活菌饮料，由酵母菌、醋酸菌和乳酸菌共同发酵产生．纯化菌种时，在固体培养基上常用 法接种菌种．在接种活菌前，将红茶糖液煮沸后冷却，煮沸的目的是 

（2）茶饮料所用的胡萝卜素，通常采用 法从胡萝卜中提取；提取后常用 法对提取物中的胡萝卜素进行鉴定．

（3）茶饮料所用的植物芳香油的提取流程如下：茉莉花+水→过程A→油水混合物→油层分离与粗提取→加无水硫酸钠→过滤→茉莉油过程A表示 ，向粗提精油中加入无水硫酸钠的目的是 

（4）从茶叶中分离提取某种氧化酶，常采用 法，其原理是蛋白质分子的大小、形状和所带 的不同，会产生不同的迁移速度．

①培养纤维素酶分解菌的土样最好选择在 环境采集．

②以下是一种培养基配方：纤维素5g、NaNO₃1g、Na₂HPO₄•7H₂O1.2g、KH₂PO₄0.9g、MgSO₄•7H₂O0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000mL）．

该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是培养基中 是主要碳源，有利于纤维素分解菌生长，同时抑制其他微生物生长．

③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用 方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养．

（1）培养硝化细菌时，将含有固体培养基的培养皿倒置的目的是 ．培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供 ，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于培养基．

（2）硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的 ．若实验组每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行 处理．

（3）实验：探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小．取含铵盐的液体培养基均分成 等分，其pH值可依次调节为 ，培养相同的时间后，可通过测定培养基中的 来判断硝化细菌分解能力的大小．

酵母菌是日常生产和生活中应用极其广泛的一种微生物．下图是有关酵母菌的实验操作．请据图回答：

（1）实验中试管用滤膜封口，其目的是  ， A．C过程所采用的接种方法分别是、 ．

（2）E过程利用血球计数板制片时，操作步骤是  ， 多余的培养液用滤纸吸去．

（3）G过程利用酵母菌进行果酒制作，为适当提高果酒的生产速率，进气口应 ，制作好的果酒，还可继续生产果醋，用果酒制作果醋的原理是 （写化学反应式）．

（4）H过程进行酵母细胞固定化的方法是 ，在用注射器将海藻酸钠和酵母细胞的混合液滴加到X溶液中时，应注意控制好

①都需要用固体培养基      

②都需要使用接种针进行接种

③都需要在火焰旁进行接种  

④都可以用菌落数来计数活菌．