| 回答用农杆菌转化法获得转基因水稻的相关问题:
Ⅰ.选择使用的两种限制性核酸内切酶,对含目的基因的DNA片段和T质粒进行处理,然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。两种限制性核酸内切酶作用可以避免自身环化和
Ⅱ.取处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作,使重组质粒进入农杆菌,完成转化实验。然后在离心管中加入液体培养基,置于摇床慢速培养一段时间,其目的是。
Ⅲ.用含重组质粒的农杆菌和水稻细胞进行共培养,使携带目的基因的T-DNA片段移到水稻细胞并将其插入到水稻细胞的中,保证目的基因在水稻细胞中稳定和高效地表达。共培养后,外植体需要转移到含有的培养基上进行脱菌培养,然后才能进行植物组织培养。
Ⅳ.获得目的基因的水稻细胞经脱分化形成愈伤组织,再以诱导,直至再生出新植株。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有:植物激素配比、愈伤组织继代的次数,以及(答出2点即可) |