| 巢式PCR反应体系中需要加入模板、、、引物、Mg2+、缓冲液等。 |
| 相比于常规PCR获得的产物而言,巢式PCR获得的产物特异性,原因是如果利用外引物扩增产生了错误片段,再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率。 |
| 巢式PCR通常在一个试管中进行第一阶段反应,然后将中间产物等转移到第二试管中进行第二阶段反应,不在同一试管完成的主要原因是。 |
科研人员利用多重巢式PCR技术同时扩增Y染色体上雄性决定基因(SRY)和常染色体上的酪蛋白基因(CSN1S1),进行早期胚胎的性别鉴定,并将鉴定后的胚胎进行移植。下表是主要实验步骤,请完成下表:
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实验目的
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方法步骤要点
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胚胎样品DNA提取
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选取囊胚的①细胞提取DNA
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PCR引物的设计和合成
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根据牛的SRY和CSN1S1基因序列设计合成②对引物
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PCR过程
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预变性→③→退火→延伸
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观察扩增结果
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电泳分析
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受体牛④处理
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对受体牛注射前列腺素
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胚胎移植
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将筛选出的胚胎移植到受体牛的子宫内
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| 电泳结果如下图所示,1~5号为取自不同胚胎的DNA样品进行巢式PCR的产物。A和B条带中代表CSN1S1的是。可以确定1~5号中号胚胎为雌性。
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| 牛胚胎性别的鉴定除了可以利用PCR外,下列方法也可行的有。
①差速离心法
②核酸探针杂交法
③染色体核型分析法
④H-Y抗血清免疫学法(H-Y抗原编码基因位于Y染色体上) |