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部编版： 必修1《分子与细胞》
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  • 1． 新冠病毒是一种单链RNA病毒，常用“荧光RT-PCR技术”进行检测，方法是取检测者的mRNA在试剂盒中逆转录出cDNA，并大量扩增，同时利用盒中荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA，在检测过程中，随着PCR的进行，反应产物不断累积，“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加，可通过荧光强度的变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图（如下图）。请回答下列问题：

    题中“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中应该含有 酶、酶、检测者mRNA，、引物，dNTP、缓冲体系。
    如果要同时扩增两种基因，则试剂盒中的引物应该有种，引物的作用是。
    上图中“平台期”出现的最可能的原因是。理论上，在检测过程中，有荧光标记的“杂交双链”出现，则说明检测结果呈（填“阴”或“阳”）性，但为了保证检测结果的准确性，一般要达到或超过阈值时才确诊。现有甲乙两个待检样本，检测时都出现了上述形态的曲线，但甲的a点比乙的a点明显左移，请给这种结果做出科学合理的解释（试剂盒合格且正常，操作过程规范且准确）：。
    难度： 中等 题型:常考题 来源：河北省唐山市一中2021-2022学年高三上学期生物期中考试试卷
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  • 2． 微生物吸附是重金属废水的处理方法之一。金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白，具有吸附重金属的作用。科研人员将枣树的MT基因导入大肠杆菌构建工程菌。回答下列问题：
    根据枣树的MTcDNA的核苷酸序列设计了相应的引物（图1甲），通过PCR扩增MT基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为。

    本实验中，PCR所用的DNA聚合酶扩增出的MT基因的末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P将MT基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图1乙所示。

    ①选用酶将载体P切开，再用（填“T4DNA或“E·coli81DNA”）连接酶将MT基因与载体P相连，构成重组载体P′。

    ②载体P′不具有表达MT基因的和。选用酶组合对载体P′和载体E进行酶切，将切下的MT基因和载体E用DA连接酶进行连接，将得到的混合物导入到用离子处理的大肠杆菌，筛出MT工程菌。

    MT基因在工程菌的表达量如图2所示。结果仍无法说明已经成功构建能较强吸附废水中重金属的MT工程菌，理由是。

    难度： 困难 题型:真题 来源：2021年高考生物真题试卷（福建卷）
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  • 3． 实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到在特定光激发下发出荧光（如图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。下列相关叙述错误的是（　　）

    A: 每个模板DNA分子含有2个游离的磷酸基团
    B: 在反应过程中，无需ATP为新链的合成提供能量
    C: 做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针
    D: 荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明含有的病变的概率越小
    难度： 中等 题型:模拟题 来源：江苏省南通市2022届高三上学期生物第一次教学质量监测试卷
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  • 4． 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，经过多次PCR扩增。从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA，不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景，下图表示利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。下列叙述正确的是（   ）

    A: 引物中G＋C的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性越高
    B: 在第一阶段由于引物2和引物3发生碱基互补配对，因此两者置于不同反应系统中
    C: 引物1、2组成的反应系统和引物3、4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生4种双链DNA分子
    D: 在引物1、2组成的反应系统中，经第一阶段要形成图示双链DNA，至少要经过3次复制
    难度： 中等 题型:模拟题 来源：江苏百校2022届高三生物高考一模联考试卷
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  • 5． 普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（GhMmaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β甘露糖苷酶催化半纤维素降解.棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下。请分析回答：

    纤维细胞E6启动子基本组成单位为，基因表达载体除了图示组成外，至少还有等（至少答两个），构通的因表达载体的目的是使目的基因稳定存在并且可以遗传在下一代，使目的基因能够。
    PCR技术扩增β－甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）原理是，该过程除需要根据设计特异性引物序列处为保证GhMnaA2能插入到质粒2中，还需要在引物的端添加限制酶识别序列。
    为什么不能用GhMnaA2探针进行DNA分子杂交来鉴定基因表达载体是否导入棉花细胞？。
    ③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaI酶和NotI酶切割正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、8.45kb四种长度的DNA片段，则用NotI酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是和。
    导入细胞内的反义GhMnaA2能阻止β－甘露糖甘酶合成，使棉纤维更长原理是。
    难度： 困难 题型:模拟题 来源：江苏百校2022届高三生物高考一模联考试卷
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  • 6． 刍草是玉米是原始祖先，具有较强的抗病抗逆特性，为玉米育种提供了原始的遗传材料。研究发现大刍草基因组中有一个D基因仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究D基因表达对卵细胞的影响，设计了实验。据图回答：

    D基因在大刍草卵细胞中不转录，从基因结构角度推测其可能的原因是卵细胞中。
    要构建大刍草的CDNA文库，应从大刍草中提取总RNA，原因是。由总RNA在相关酶的作用下获得D基因编码蛋白的序列。按如图所示构建重组表达载体。
    在过程①、②转化筛选时，过程中T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上。
    从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下大刍草卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明。
    在大刍草基因组中发现另一个B基因与其育性相关，为进一步研究B基因的功能，研究者将一段T-DNA插入到B基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为b，现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如表所示：

    杂交编号

    亲本组合

    结实率

    a

    ♀BB×♂bb

    0.1

    b

    ♀bb×♂BB

    0.5

    c

    ♀BB×♂BB

    0.5

    ①表中数据表明B基因失活后使配子育性降低。

    ②让杂交a的F1给杂交b的F1授粉，得到F2。为验证F2植株的基因型，研究者据B基因、T-DNA的序列设计了3种引物，如图所示：

    随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用“引物I+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否能扩增（完整的T-DNA过大，不能完成PCR扩增）

    如果引物“I+Ⅲ”组及“Ⅱ+Ⅲ”组进行PCR均可完成扩增，则相应植株的基因型为。

    如果，则相应植株的基因型为BB。
    难度： 中等 题型:模拟题 来源：湖北省恩施州2022届高三生物第一次教学质量监测试卷
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  • 7． 据报道，美国科研人员通过基因转移技术，从根本上治愈了实验小鼠所患的Ⅰ型糖尿病，这种技术把选定的X基因输入胰腺，这些基因随后得到整合并促使消化系统和其他类型的细胞制造胰岛素，请回答下列问题：
    在基因工程中，X基因称为。利用PCR技术扩增X基因时，需要在反应体系中添加的有机物质是、、4种脱氧核苷酸和热稳定的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
    将X基因导入小鼠体内之前，需要操作的核心步骤是，此步骤最常用的运载工具是，所需要的酶是限制酶和。
    X基因的检测可从分子水平和个体水平两方面进行，在分子水平上通常采用技术检测X基因是否导入受体细胞，在个体水平上应检测。
    难度： 中等 题型:模拟题 来源：福建省福州市华侨中学2022届高三生物高考二模试卷（10月）
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  • 8． 去年年初，国内牛奶制品因为牧草进口成本上涨而涨价的现象引起了人们的关注。紫花苜蓿是一种重要的牧草，某研究团队拟将耐盐基因HLAl导入紫花苜蓿中培育耐盐牧草，具体实验流程如图甲，图乙是载体pCHLAl中T-DNA示意图。回答下列问题：

    过程②为，是基因工程的核心步骤，此过程需要使用的酶有。
    过程③常用的转化方法是农杆菌转化法，转化是。
    已知Basta是一种除草剂，则为达到培养并筛选的目的，过程④的培养基所含的成分必须含无机营养、有机营养、。
    过程④得到的幼苗（填“一定”或“一定不”或“不一定”）含有HLAl基因，为进一步确认，可用PCR扩增的方法进行鉴定，进行PCR反应所用到的引物应根据设计。
    要检测目的基因是否插入到苜蓿细胞的染色体DNA上，可采用技术。
    判断本实验的目的基因是否表达成功，还应进行实验。
    难度： 困难 题型:常考题 来源：广西“韬智杯”2021-2022学年高三生物9月大联考试卷（理）
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  • 9． 某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是（    ）
    A: 增加模板DNA的量
    B: 延长热变性的时间
    C: 延长延伸的时间
    D: 提高复性的温度
    难度： 简单 题型:真题 来源：2021年高考生物真题试卷（湖北卷）
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  • 10． 某种地中海贫血（TDT） 是严重的单基因病，严重时可能危及生命。人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL1IA蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对TDT患者实行基因治疗。研究人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，可以确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。分析回答：

    图中启动子是识别和结合位点， 绿色荧光蛋白基因作为。
    PCR扩增γ基因上游不同DNA片段的原理是，为使PCR反应体系中的模板解链为单链，需要满足的条件是。
    将扩增后的产物定向插入载体指导绿色荧光蛋白基因表达，需要在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在R末端添加的序列所对应的限制酶应为。实验中R等引物的作用是。
    从产物扩增到载体构建完成的整个过程中，除限制酶外，还必须用到的工具酶有DNA连接酶和，其中前者催化形成的化学键是。
    将构建好的载体成功转化至除去BCLIIA基因的受体细胞中，结果发现，含F1~F6与R扩增产物的受体细胞发出绿色荧光。向培养液中添加适量的雌激素，含F1~F4与R扩增产物的受体细胞荧光消失，而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游的调控序列上与引物所对应的位置不含有BCL1IA蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCLIIA 蛋白结合位点位于。
    难度： 困难 题型:模拟题 来源：山东省泰安肥城市2022届高三上学期生物高考一模试卷
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