在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖．

①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在旁称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作；吸取锥形瓶中土壤液的上清液mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液．

②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作．在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如表）．

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是．

为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．应从（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．

①排气口弯管设置的目的是．

②可通过装置中的对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较．

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变进行生产．

⑴检验大肠杆菌的含量时，通常将水样用（液体）进行一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用涂布到培养基表面上，然后将培养皿于恒温培养箱，在℃条件进行培养。

⑵下图表示利用分离法分离和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是。

A.步骤①倒平板操作时，只需要在超净台中不需要在酒精灯火焰旁进行

B.步骤②③使用的工具是接种环，接种前需在明火上烧红后冷却

C.步骤④恒温培养箱培养后的结果说明整个过程中蘸取菌液4次

D.该方法使单菌落更容易分开，但操作复杂些

⑴原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5〜0. 6mol/L的（维持较高渗透压）的果胶酶和纤维素酶混合液处理，经过离心纯化后获得形原生质体。

⑵原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经胚、心形胚和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出苗，切割芽经过生根后形成完整植株。

⑶为了对烟草的某些性状进行改良，可借助工程方法，将外源遗传物质（DNA)导入原生质体受体，再对其进行培养获得具有特定性状的再生植株。上述操作属于工程技术的操作过程。

①目的菌株筛选后应该利用培养基进行扩大培养，是消除污染杂菌的通用方法。

②制作葡萄酒过程中，为了酵母菌迅速发生作用，可加少量混匀。将葡萄浆放入发酵瓶，装量不超过（A.1/2 B.2/3 C.3/4 D.100%），当发酵瓶表示发酵完毕。

③醋的制作中发酵瓶中装锯末至，将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒-水混合物中，混匀，并调pH至后，倒入发酵瓶。

⑴过程①中构建重组表达载体所需要的酶是限制性核酸内切酶和。（A.DNA聚合酶   B.DNA连接酶   C.逆转录酶 D.解旋酶）

⑵在过程②中，用处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞，置于中培养。

⑶在过程③中，一般用激素处理供体母牛，使其超数排卵；对供体母羊和代孕母羊进行处理。

⑷从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎。