| 研究者利用噬菌体文库筛选能与VEGF特异性结合的多肽。过程如下。
①将人工合成的编码随机六肽的基因插入噬菌体DNA,形成重组DNA分子,用重组DNA分子转化大肠杆菌,大肠杆菌经培养后裂解,产生噬菌体。这些噬菌体构成一个文库,一个包含所有可能六肽的噬菌体文库至少有种噬菌体组成,在这些噬菌体中可能有某种六肽能与VEGF特异性结合(图一)。
②将VEGF能够与受体结合的部位固定在微孔容器底部,在微孔中加入随机肽文库,一段时间后用缓冲液洗去不能与VEGF结合的噬菌体,然后用含有的缓冲液将结合在微孔底部的噬菌体洗脱下来,这种分子能够与微孔容器底部的分子竞争性结合噬菌体,这说明噬菌体与目标分子的结合是(可逆或不可逆)的。 ③将洗脱下来的噬菌体转入另一试管,加入,经过一段时间振荡培养,产生新一代噬菌体库。 ④重复步骤②③多次。 |