| 为获取phb2基因,提取该动物肝脏组织的总RNA经RT—PCR获得大量的目的基因,该过程使用到的酶有 。 |
| 图1为所用载体图谱示意图,图中限制酶的识别序列及切割位点见表。为使phb2基因(该基因序列不含图1中限制酶的识别序列)与载体正确连接,在扩增的phb2基因两端需添加和两种限制酶的识别序列。双酶切避免了目的基因与载体的 连接,同时减少目的基因与目的基因、载体与载体的连接,以提高重组质粒的比例。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时,需使用的酶是。 |
| 转化前需用CaCl2处理大肠杆菌细胞,使其处于态的生理状态,以提高转化效率。 |
| 将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养,随机挑取菌落(分别编号为1、2、3、(4)培养并提取质粒,用(2)中选用的两种限制酶进行酶切,酶切产物经电泳分离,结果如图2,号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。 |
| 将纯化得到的pHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中,培养24小时后,检测处于细胞周期(图3)不同时期的细胞数量,统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是:将细胞阻滞在细胞周期的(填“G1”或“S”或“G2/M”)期。 
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